Аналіз спинномозкової рідини (ліквору) є потужним інструментом для покращення виявлення різних процесів, що відбуваються в центральній нервовій системі, таких як кровотечі, запалення, інфекції, пухлини та інші клінічні стани. Крім того, серійні оцінки сполук у спинномозковій рідині (таких як гормони, ліки, нейротрансмітери, біомаркери, метаболіти та віруси) однаково важливі як у фундаментальних, так і в трансляційних дослідженнях. Об’єм спинномозкової рідини в центральній нервовій системі підтримується стабільним шляхом секреції та всмоктування.
I. Операційні міркування
ЦСЖ зазвичай збирають або через церебральний шлуночок, або через люмбальну пункцію. Люмбальна пункція несе порівняно менший ризик ускладнень у приматів, не-людей, оскільки у більшості видів місце поперекової пункції знаходиться на відстані від кінця спинного мозку. Необхідні належна анестезія та асептичні методи, включаючи підготовку місця, наприклад гоління, та використання стерильних матеріалів. Слід використовувати принаймні стерильні рукавички, шприци та голки, враховуючи стерильні хірургічні пов’язки. Збір ліквору зазвичай виконується в положеннях лежачи на боці, грудині або сидячи, покращуючи доступ до шлуночків головного мозку або розширюючи міжхребцевий простір за рахунок згинання шиї або хребта. Розмір і довжина вибраної голки має відповідати виду та розміру не-приматів. Техніка, обладнання, витратні матеріали, що використовуються під час процедури, і післяопераційний догляд відрізняються залежно від виду, цілей дослідження та переваг клінічного ветеринара.
Деякі протоколи дослідження можуть вимагати безперервного збору ліквору протягом тривалого часу або збору зразків ліквору у суб’єктів без анестезії. Для цих протоколів безперервний збір ліквору у неспаних макак-резусів може бути досягнутий за допомогою-довгострокових імплантованих катетерів ліквору, підключених до підшкірних портів для збору.
Автор доклав усіх зусиль, щоб знайти найновіші посилання щодо загального об’єму СМР, обмежень або рекомендацій щодо пункцій дуральної оболонки, частоти збору, безпечного об’єму виведення та швидкості поповнення СМР. Література щодо цього аспекту обмежена для більшості не-приматів. Крім того, методи збору різняться, оскільки опитування членів Ветеринарної асоціації не-людських приматів свідчать про те, що різні установи успішно використовують різні методи збору ліквору. Таким чином, автор надає міркування та рекомендації щодо збору СМР на основі наявних найкращих доказів.
Для довідки, попередні дослідження показали, що уявний об’єм ЦСР у дорослих самців макак-резусів (8,0-10,6 кг) становить 10+/-0,06 мл, зі швидкістю потоку ЦСР 0.018+/-0,003 мл/хв. Швидкість утворення СМР у макак-резусів коливається в межах 28,6-44,2 мкл/хв. У цій галузі необхідні подальші дослідження нелюдських приматів, щоб сприяти розробці більш повчальних рекомендацій.
II. Потенційні побічні реакції
Хоча ускладнення під час збору CSF у не-приматів трапляються рідко, анатомічні варіації та неправильні або невідповідні технічні методи можуть призвести до пошкодження зразка або ускладнень, таких як кровотеча, грижа, інфекція, пошкодження стовбура мозку, спинного мозку або нервових корінців, а також дискомфорт тварини. Хоча ці ускладнення рідкісні, вони можуть поставити під загрозу добробут тварин.
З огляду на пов’язані з цим ризики, CSF повинен збирати ветеринар або навчений ветеринарний персонал. Для невдалих спроб збору ЦСЖ методики можуть відрізнятися. Зазвичай допускається до трьох невдалих спроб однієї особи. Після третьої невдалої спроби інша кваліфікована особа повинна взяти на себе роботу. Якщо друга особа не може зібрати СМР після трьох спроб, спроби слід припинити. Тим часом тварина отримає відповідне знеболююче лікування та відійде від наркозу. Зміна місця збору (наприклад, із шлуночків головного мозку на поперековий) після невдалих спроб часто призводить до успіху. У разі невдалої спроби без візуалізації можна використати флюорографію-за допомогою розміщення голки. Окрім підвищення рівня успіху, наведення зображення також може зменшити частоту травматичних проколів.
Післяопераційний моніторинг має тривати до тих пір, поки тварина не повернеться у свою клітку і зможе зберігати вертикальне положення без підтримки. Моніторинг тварин повинен тривати щонайменше 24 години або відповідно до протоколу, затвердженого Комітетом з догляду та використання тварин закладу (IACUC). Моніторинг повинен включати оцінку основних фізіологічних, поведінкових і опорно-рухових параметрів. Слід особливо оцінити ознаки неврологічної дисфункції, включаючи, але не обмежуючись, млявість, депресію, кому та ознаки натискання голови. Головні болі та, як наслідок, внутрішньочерепна гіпотензія після збору ліквору не є рідкістю в людській медицині. Враховуючи це потенційне ускладнення у не-приматів, анальгетичну терапію слід проводити під час операції та продовжувати протягом 2-3 днів після операції або за потреби на основі післяопераційних спостережень, пов’язаних із поведінкою, пов’язаною з головним болем або болем у хребті. Найефективнішою схемою знеболення може бути комплексне лікування, розпочате перед операцією.
III. Міркування IACUC та ведення записів
IACUC повинен бути ознайомлений із процедурами, пов’язаними зі збором СМР, і всіма потенційними ускладненнями та переглядати їх принаймні раз на рік. Усю важливу інформацію, таку як дозування ліків, передопераційну підготовку, зібрані об’єми СМР, частоту збору та коротко{1}} та довгострокове- післяопераційне відновлення, слід описати в протоколі IACUC і належним чином задокументувати в медичних записах або лабораторних журналах.
Хоча СМР може бути важливим даним у протоколах досліджень, неправильні методи збору можуть вплинути на добробут тварин. При поданні протоколів необхідно надати наукове обґрунтування кількості та періодичності зборів. Зокрема, IACUC має ретельно оцінити кожну пропозицію щодо збору ліквору та розглянути наступне:
1. Чи необхідний збір СМР для досягнення наукових цілей, викладених у протоколі?
2. Чи існують альтернативні методи та менш інвазивні методи оцінки центральної нервової системи (такі як методи візуалізації), і якщо так, чи розглядалися вони?
3. Чи пройшли оператори відповідну підготовку та мають достатні навички?
4. Чи буде забезпечена відповідна періопераційна анестезія та знеболюючі режими? Необхідно проконсультуватися з ветеринарами лабораторних тварин щодо планів анестезії та анальгетиків.
5. Чи враховує зібраний об’єм ліквору вік і розмір тварини?
6.Чи підходить тварині кількість і частота пункцій твердої мозкової оболонки, і чи зведений до мінімуму ризик ускладнень? Якщо в дослідженні беруть участь кілька зборів СМР, слід вказати максимальний час збору для кожної тварини.
7. Чи відповідний план післяопераційного моніторингу?
8. Чи були враховані всі можливі післяопераційні ускладнення та чи були перераховані всі розумні втручання, включаючи евтаназію?
