1. Що включають доклінічні дослідження?
відповідь:Доклінічні експерименти включають фармакологічні дослідження, тести на загальну токсичність, експерименти з токсикокінетики та доклінічної фармакокінетики, тести на репродуктивну токсичність, тести на генотоксичність, канцерогенність та інші тести (фототоксичність, залежність, імунотоксичність) тощо. У випадках комбінованої терапії можуть також проводитися доклінічні дослідження безпеки комбінованої терапії. Для певної високої частки (більше 10% загальної системної експозиції та рівень експозиції в дослідженнях на тваринах нижчий, ніж експозиція на людині), може знадобитися проведення доклінічних досліджень безпеки метаболітів.
2. Яка мета доклінічної оцінки безпеки?
відповідь:Мета доклінічної оцінки безпеки зазвичай включає з’ясування характеристик реакції токсичності, пов’язаних з органами-мішенями, залежністю від дози, взаємозв’язком експозиції та потенційною оборотністю. Ця інформація може бути використана для оцінки безпечної початкової дози та діапазону доз для клінічних випробувань на людях (як згадувалося раніше, NOAEL необхідно отримати в токсикологічних експериментах для розрахунку MRSD, максимальної рекомендованої початкової дози), а також для визначення показників клінічного моніторингу потенційних побічних реакцій.
3. Які доклінічні дослідження потрібні для перших--випробувань на людях?
відповідь:Для цього питання спочатку необхідно уточнити вид препарату. ICH M3 (R2) застосовується до звичайних ситуацій у розробці ліків і містить загальні керівні принципи. Для біологічних препаратів доклінічні дослідження слід проводити відповідно до вимог ICH S6.
⑴Фармакокінетика:Перед подачею IND достатньо даних про метаболізм досліджуваного продукту у різних видів і даних про метаболізм in vitro у людини, а також швидкість зв’язування з білками плазми. Інформація щодо всмоктування, розподілу, метаболізму in vivo та виведення має бути завершена до широкомасштабних-клінічних випробувань (зазвичай фаза 3). Експерименти з фармакокинетичним поглинанням, як правило, проводяться на кількох видах перед подачею IND і визначенням PCC, щоб краще зрозуміти фармакокинетичні характеристики препарату в різних видів, хоча тут це не обов’язково, що є трохи дивним.
⑵Фармакологія безпеки:Оцінку впливу на серцево-судинну, центральну нервову та дихальну системи слід завершити перед подачею IND, яка є комбінацією стандартних фармакологічних тестів безпеки. У разі необхідності під час клінічних випробувань можуть бути проведені додаткові фармакологічні експерименти з безпеки.
⑶Токсичність повторної дози:Як правило, короткочасний тест на хронічну токсичність організовується на основі ранньої схеми дозування IND. Якщо період дозування потрібно продовжити пізніше, для підтвердження цього необхідно провести довготривалий-тест на хронічну токсичність.
⑷генотоксичність:Завдяки відносно низькій вартості комбінацію тестів на генотоксичність можна завершити до подання IND.
⑸Канцерогенність:Тестування на канцерогенність має бути завершено до схвалення препарату.
⑹Репродуктивна токсичність:Спостереження та оцінка репродуктивної системи повинні бути включені в тести на токсичність при повторних дозах перед подачею IND для попередньої оцінки репродуктивної токсичності, причому під час клінічних випробувань достатньо суворої контрацепції. Дослідження репродуктивної токсичності фази I/II слід завершити перед широкомасштабними-клінічними випробуваннями, а дослідження репродуктивної токсичності фази III слід завершити до схвалення.
⑺Фототоксичність:Оцінку фототоксичності слід завершити до подання IND. Якщо молярний коефіцієнт поглинання перевищує 1000 М-1см-1, вважається ризик фототоксичності, тому тестування на фототоксичність слід проводити перед широкомасштабними клінічними випробуваннями.
4. Як слід встановлювати дози в токсикологічних тестах? Як вибрати найвищу дозу?
відповідь:Посилаючись на «Принципи технічної інструкції щодо випробувань на токсичність повторних доз лікарських засобів», «В принципі, високі дози мають викликати очевидні токсичні реакції у тварин, низькі дози мають бути еквівалентними або вищими за ефективну дозу для тварин або клінічного використання, а середні дози слід встановлювати між високими дозами та низькими дозами на основі токсичного механізму та характеристик, щоб перевірити зв’язок токсичності між дозою-реакцією».
На практиці, враховуючи високу вартість токсикологічних тестів, проведення тесту-визначення діапазону доз (DRF) з кількома-нелюдськими приматами є найбільш-рентабельним і труд-економним методом. Доза для тестів DRF також повинна бути додатково встановлена на основі попередніх досліджень безпеки, проведених під час раннього визначення PCC та фармакологічних досліджень. Зараз багато установ також проводять тести на гостру токсичність разом із тестами DRF, які не є -тестами GLP, як зазначено в M3 (R2), дотримуючись принципу 3R, щоб зменшити використання тварин.
Для груп із низькою, середньою та високою дозами зазвичай використовується інтервал 2-3 рази. У офіційних токсикологічних тестах ідеальна ситуація полягає в тому, що група з високою дозою може продемонструвати очевидну токсичність, а групи з низькою або середньою дозою можуть використовуватися як NOAEL.
Крім того, для вибору найвищої дози M3 (R2) також надає стандартні відповіді. Простіше кажучи, найвища доза в токсикології повинна бути або максимально переносимою дозою (MTD), або максимально можливою дозою (MFD, яку можна розуміти як максимальну дозу, яку можуть переносити тварини на основі продукту та характеристик тварин), або вона повинна досягати насичення експозиції, або рівень експозиції має бути достатньо високим (досягати 50-кратної запланованої клінічної дози). Загалом, 1000 мг/кг/день вважається достатнім, якщо призначена клінічна доза не досягає 1 г/день, а рівень експозиції 1000 мг/кг не досягає 10-кратного рівня клінічної експозиції, у цьому випадку вам потрібно додатково збільшити дозу до 10-кратного клінічного рівня експозиції, або 2000 мг/кг/день, або MFD.
5. Які дослідження в доклінічних дослідженнях безпеки повинні дотримуватися GLP, а які ні?
відповідь:Фармакологічні та фармакокінетичні дослідження не потребують дотримання GLP, тоді як дослідження фармакології безпеки, генотоксичності, репродуктивної токсичності та токсичності при повторних дозах повинні відповідати GLP.
6. Яка тривалість доклінічних досліджень токсичності при повторних дозах?
відповідь:Вимоги до тривалості для підтримки проведення клінічних випробувань і схвалення ринку відрізняються і мають бути специфічними для періоду дозування клінічних випробувань. Наприклад, для пацієнтів з розсіяним склерозом мінімальний запланований термін клінічних випробувань становить два роки. Таким чином, під час залучення пацієнтів із розсіяним склерозом до клінічних випробувань необхідно провести 6--місячне дослідження хронічної токсичності на гризунах і 9--місячне дослідження хронічної токсичності на не-гризунах, що є достатнім для схвалення на ринку. Для не{10}}онкологічних препаратів зазвичай використовується 4-тижневе дослідження хронічної токсичності, щоб підтвердити період дозування, що не перевищує 4 тижнів для перших клінічних випробувань на людях.
7. Як вибрати піддослідних тварин для доклінічної оцінки безпеки?
відповідь:Як правило, використовуються два типи тварин: гризуни з щурами є кращим вибором, і не-гризуни з собаками породи Бігль. Звичайно, слід також дотримуватися принципів-аналізу конкретних продуктів. Для малих молекул відбір видів повинен головним чином враховувати метаболічні характеристики досліджуваного продукту у тварин, подібних до людини. Можна зробити посилання на «Тест аналізу та ідентифікації метаболітів досліджуваних продуктів у мишей CD-1, щурів SD, собак бігль, мавп Cynomolgus і мікросом печінки людини», вибираючи види з метаболічними характеристиками, подібними до людських, тобто види з кількістю та типами метаболітів, подібними до людських. Крім того, вибраний вид повинен бути чутливим до досліджуваного продукту. Виходячи з минулого досвіду, для маломолекулярного препарату його метаболічні характеристики у собак породи Бігль можуть бути подібними до людських, але з низькою експозицією.
